А.П.Цибулькин: «В лабораторной диагностике главное — правильно использовать свои возможности»


p103031226 октября в Казани прошла научно-практическая конференция «Современные достижения лабораторной медицины».

Организаторами мероприятия выступили Министерство здравоохранения РТ, кафедра клинической лабораторной диагностики Казанской государственной медицинской академии Росздрава, ЗАО «Вектор-Бест», г.Новосибирск и ЗАО «Вектор-Бест-Агидель», г.Уфа.

Открывая конференцию, заведующий кафедрой клинической лабораторной диагностики КГМА д.м.н., профессор Анатолий Павлович Цибулькин рассказал о современных достижениях лабораторной медицины, об основных трудностях, с которыми приходится сталкиваться клиницистам в процессе работы и внедрения в практику новых методов. Он также отметил особую роль учебных заведений в процессе подготовки высококвалифицированных кадров. tcibulkinОбращаясь к коллегам, А.П.Цибулькин подчеркнул, что на сегодняшний день в условиях лаборатории можно с практически стопроцентной точностью провести любую диагностику, главное, правильно использовать свои возможности.

Первым докладчиком была к.б.н., заместитель начальника отдела биохимии ЗАО «Вектор-Бест» (г.Новосибирск) Галина Евгеньевна Яковлева. Она рассказала о результатах и перспективах развития биохимической продукции. Сейчас российскими учеными выпускаются наборы для лабораторий на основе современных методов анализа, принятых в мировом лабораторном сообществе, ферментативные и химические, колориметрические и УФ, кинетические и по конечной точке. Аналитические характеристики наборов сравнимы с зарубежными аналогами. Коэффициент их корреляции составляет не менее 0, 98.

Следующий доклад на тему «Биохимические методы диагностики заболеваний печени и сердца» представила к.б.н. ведущий научный сотрудник отдела биохимии ЗАО «Вектор-Бест» (г.Новосибирск) Галина Евгеньевна Яковлева.


Применение ферментных тестов используется для установления диагноза, дифференциальная диагностика, наблюдение динамики течения болезни, оценка эффективности лечения, прогноз заболевания. Повышение в крови уровня фермента указывает на повреждение клеток той ткани, в которой этот фермент представлен в наибольшем количестве. Анализ уровня ферментов основан не на измерении их количественного содержания, а на определении их каталитической активности. Под активностью фермента понимают скорость катализируемой им реакции, т.е. Скорость, с которой происходит расходование субстрата или накопление продукта ферментативной реакции. Правильные точные результаты определения активности фермента можно получить только на линейном участке реакции, когда реакция идет с постоянной скоростью, т.е. Изменение оптической плотности одинаково за равные промежутки времени. Постоянная скорость ферментативной реакции сохраняется только при насыщающей концентрации субстрата в реакционной смеси.

jakovlevaМетоды определения активности ферментов — по конечной точке и кинетические. Методы «по конечной точке» основаны на определении окрашенных продуктов реакции после фиксированного времени инкубации и остановки реакции. Недостатки этого метода: длительность анализа, использование агрессивных реагентов для остановки реакции, необходимость построения калибровочного графика, низкая чувствительность, контрольные сыворотки не аттестованы по этим методикам.

Кинетическое определение основано на многократном измерении оптической плотности реакционной смеси через равные промежутки времени. Его преимущества: возможность контроля линейности реакции, быстрота анализа, отсутствие агрессивных жидкостей, возможность автоматизации, высокая чувствительность. В колориметрических методах используются хромогенные субстраты. Скорость развития окраски реакционной смеси прямо пропорциональна активности фермента.

Основной причиной нарушения линейности ферментативной реакции является недостаточная концентрация концентрация субстрата в реакционной смеси.


p1030288Факторы, влияющие на активность ферментов: температура и pН среды, природа и концентрация субстрата, активатор и его концентрация, ингибитор и его концентрация, тип буфера и его концентрация. Результат определения активности фермента существенно зависит от метода определения, условий проведения реакции.

К печеночным ферментам относятся аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ), щелочня фосфатаза (ЩФ). АЛТ и АСТ катализируют обратимый перенос аминогруппы с соответствующей аминокислоты на кетоглутаровую кислоту. ЩФ катализирует отщепление фосфорной кислоты от ее органических эфирных соединений при щелочном значении pH. ГГТ катализирует перенос гамма-глутамилового остатка с гама-глутамилового пептида на другой пептид или аминокислоту. У 100% онкологических больных с метастазами в печень установлено весьма значительное повышение ГГТ (в 12 и более раз превышающее норму).

К миокардиальным ферментам относятся креатинкиназа (КК), аспартатаминотрансфераза (АСТ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ). Ферментные маркеры ИМ обладают высокой диагностической чувствительностью, их повышенная активность выявляется у 90-98% больных.

Изоферменты — это ферменты, катализирующие одну и ту же реакцию, но несколько отличающиеся по своему аминокислотному составу, в следствие чего они могут иметь различный молекулярный вес и электрофоретическую подвижность, а также отличаться по своим иммунологическим и биохимическим характеристикам.

ЛДГ — гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление лактата в пировиноградную кислоту. КК катализирует обратимую реакцию переноса фосфорильного остатка с АТФ на креатин и с креатинфосфата на АДФ.

kurbatovaВ следующем выступлении  к.б.н. Галина Евгеньевна Яковлева рассказала о новом в определении активности общей и панкреатической альфы-амилазы. Причины изменения активности общей альфа-амилазы в почечной недостаточности, заболеваниях слюнных желез, макроамилаземия, опухоли поджелудочной железы, некоторые опухоли надпочечников и яичников, абдоминальная травма, перитонит, заболевания желчных путей всех типов, состояния после операции, алкоголь, некоторые лекарственные препараты. Острый панкреатит бывает в 100-250 случаев на 1 млн. чел. в год. В 80% случаев острый панкреатит проходит без серьезных последствий. В 20% случаев — вызывает серьезные осложнения. Общий уровень смертности — 10-30%. В лабораторной диагностике заболевания не существует «золотого стандарта».

Способы определения активности альфа-амилазы: амилокластический метод Каравея и кинетические методы. Недостатки метода Каравея в качестве субстрата, интерференции, узкой линейной области определения и зависимости интенсивности окраски йодом от температуры. Кинетический метод в качестве субстрата использует CNP-олигосахарид. Преимущества этого метода в том, что реагенты не содержат дополнительных ферментов, монорегаент для определения общей альфа-амилазы — жидкий, продукты гидролиза не полимеризуются с субстратом, есть коммерческие наборы для определения панкеатической альфа-амилазы.

Научный сотрудник отдела биохимии ЗАО «Вектор-Бест» Алена Александровна Басова в своем выступлении рассмотрела типичные ошибки при определении биохимических показателей.

Ошибки исследований могут быть как на преаналитаическом, так и на аналитическом и постаналитическом этапе.

На преаналитическом этапе ошибки могут быть связаны с неправильной подготовкой больного, нарушения процедуры взятия крови у пациента, неправильное хранение, неправильная подготовка биологического материала к исследованию, канцелярские ошибки. На постаналитическом этапе это неправильная интерпретация результатов, неправильный диагноз и канцелярские ошибки.

basovaПодробно докладчик остановилась на причинах ошибок, которые случаются на аналитическом этапе. Среди них устаревшие методы, неисправность прибора, грязная посуда, наконечники и картриджи, нарушение условий анализа, нарушение условий хранения, ошибки калибровки, ошибки в расчетах. Кроме устранения этих ошибок также рекомендовалось обращать внимание на то, что нельзя сильно встряхивать растворы ферментов и допускать образование пены при их перемешивании. При растворении лиофилизированных реагентов, контрольных материалов и контрольных сывороток, содержащих ферменты, перед использованием необходимо выдержать указанное в инструкции время. При построении калибровочных кривых необходимо сделать не менее 4-5 параллельных определений холостой пробы и каждого стандартного образца. Строить калибровочную кривую/вычислять фактор следует для каждой новой серии наборов или при смене фотометрического оборудования. Нельзя изменять соотношение рабочий реагент/сыворотка.

После небольшого перерыва конференция была продолжена. Во второй части перед собравшимися выступили научный сотрудник ЗАО «Вектор-Бест-Агидель» (г.Уфа) Тимур Валерьевич Майстренко с докладом «Аллергодиагностика in vitro», ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики КГМА Лия Михайловна Анцилевич, рассказавшая об опыте применения аллергопанелей в Республике Татарстан, д.м.н., профессор кафедры клинической лабораторной диагностики КГМА Георгий Валентинвич Черепнев с докладом о настоящем и будущем диагностики аутоимунных заболеваний, заведующий клинико-диагностической лабораторией РКБ №1 Дамир Талибович Сиразетдинов с информацией главного специалиста по клинической лабораторной диагностике МЗ РТ.

Светлана Емельянова