Иммунологические нарушения у детей с хронической гастродуоденальной патологией, осложненной кандидозной инфекцией


Проведено комплексное иммунологическое обследование 62 детей в возрасте от 7 до 17 лет с хронической патологией желудочно-кишечного тракта, ассоциированной с грибами рода Candida. Установлено, что в основе развития кандидозной инфекции при ХГД и ЯБДК у детей лежат нарушения клеточного звена иммунитета и фагоцитарной активности нейтрофилов. Выявленные нарушения иммунологических показателей при ХГД и ЯБДК у детей, осложненных кандидозной инфекцией, являются основанием для изучения возможности иммуномодулирующей терапии.

Immunological disorders in children with chronic gastroduodenal pathology complicated with Candida infection

The complex immunological examination of 62 children aged 7 to 17 years with chronic disorders of the gastrointestinal tract associated with the fungi Candida was conducted. It was established that the basis for the development of Candida infections in CGD and PUD in children are violations of cellular immunity and phagocytic activity of neutrophils. Identified breaches of immunological parameters for CGD and PUD in children, complicated by Candida infection are the basis for exploring the possibility of immunomodulatory therapy.

В последние годы отмечается значительный рост частоты гастродуоденальной патологии у детей, выраженная тенденция к рецидивированию и хронизации процесса. Ведущая роль в развитии и прогрессировании хронических гастродуоденитов (ХГД) и язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (ЯБДК) придается Helicobacter pylori. Однако проводимое традиционное лечение, включающее современные схемы эрадикации хеликобактерной инфекции, не всегда приводят к желаемому эффекту. В настоящее время в условиях экологического неблагополучия, порой нерационального применения антибиотиков у больных с хронической гастродуоденальной патологией нередко имеет место ассоциация Helicobacter pylori и грибов рода Candida [1, 3, 5, 8, 9]. В развитии кандидозной инфекции важная роль принадлежит иммунологическим нарушениям [2, 4, 6, 7, 10, 11]. Исходя из этого, целью работы явился выявление иммунологических нарушений, лежащих в основе развития хронических заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированных с грибами рода Candida у детей.

Проведено комплексное иммунологическое обследование 62 пациентов в возрасте от 7 до 17 лет, имеющих хроническую патологию верхних отделов желудочно-кишечного тракта, ассоциированную с грибами рода Candida. Из них 32 ребенка с ХГД и 30 детей с ЯБДК. Контрольную группу составили 58 детей с ХГД и 29 детей — с ЯБДК, протекающих без кандидозной инфекции. Различия по полу, возрасту и клиническому течению заболевания между сравниваемыми группами статистически незначимые. В работе использован комплекс методов: клинические, лабораторно-инструментальные, иммунологические, серологические — определение циркулирующего кандидозного антигена (ЦКА) с помощью амперометрического иммуноферментного сенсора (ИФС) и культуральное микологическое обследование биоптатов слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.

Комплексное иммунологическое обследование включало оценку показателей клеточного звена иммунитета (абсолютное и относительное количество СD3+-Т-лимфоцитов, СD4+, СD8+, CD56+, CD19+-В-лимфоцитов и соотношение СD4+/CD8+), гуморального звена (IgA, IgG, IgM, ЦИК), фагоцитарной активности (спонтанный и стимулированный НСТ-тест, ФИ, ФЧ). Также определялись маркеры активации иммунной системы (ранние и поздние активационные маркеры — СD25+ и HLA DR+-лимфоциты, а также активированные Т-лимфоциты — СD3+DR) и экспрессии молекул адгезии на нейтрофилах (абсолютное и относительное количество CD11b+, CD18+, CD16+).


Анализ данных показал, что у больных с ХГД, ассоциированным с грибами рода Candida, по сравнению с контрольной группой выявлены более глубокие изменения ряда показателей клеточного, гуморального иммунитета, фагоцитарной активности нейтрофилов, маркеров активации и экспрессии молекул адгезии на нейтрофилах.

Изучение показателей клеточного звена иммунитета у больных с ХГД, ассоциированным с грибами рода Candida (табл. 1), в сравнении с контрольной группой, выявило уменьшение относительного количества СD3+-Т-лимфоцитов до 63,0±3,4% (p<0,01), относительного и абсолютного содержания СD4+-Т-лимфоцитов — до 29,2±3,8% (p<0,001) и 0,59±0,12 (p<0,01) соответственно и соотношения СD4+/СD8+ — до 0,8±0,19 (p<0,001). При этом отмечается увеличение содержания ранних и поздних активационных маркеров (табл. 2) — лимфоцитов, экспрессирующих рецептор для IL-2 (абс. СD25+ — 0,42±0,09×109/л, p<0,05), отн. — 28,4±1,9% (p<0,001), антигенов гистосовместимости II класса (HLADR+ — 30,4±3,6%, p<0,01), а также активированных Т-лимфоцитов (СD3+DR — 23,3±3,1%, p<0,05).

 Таблица 2.

Показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета при ЯБДК у детей, ассоциированной с грибами рода Candida


ПоказателиОбследуемая группаКонтрольная группа
СD3+-Т-лимфоциты, %53,1±3,0*62,7±3,11*
СD3+-Т-лимфоциты, 1090,89±0,191,01±0,24
СD4+-Т-лимфоциты, %23,0±1,8**

27,2±2,6**

СD4+-Т-лимфоциты, 109

0,38±0,26**

0,51±0,09**

СD8+-Т-лимфоциты, %

33,5±2,5

34,5±2,7

СD8+-Т-лимфоциты, 109

0,51±0,06

0,525±0,11

СD4+/СD8+

0,6±0,09*

0,8±0,1*

СD56+-Т-лимфоциты, %

21,6±3,4

24,8±3,1

СD56+-Т-лимфоциты, 109

0,32±0,10

0,41±0,08

СD19+-В-лимфоциты, %

9,5±1,1

10,4±1,7

СD19+-В-лимфоциты, 109

0,18±0,02

0,20±0,12

СD25+ -Т-лимфоциты, %

31,9±3,2**

20,2±3,6**

СD25+ -Т-лимфоциты, 109

0,53±0,09*

0,38±0,14*

HLADR+-лимфоциты, %

31,2±3,6**

24,3±3,2**

HLADR+-лимфоциты, 109

0,49±0,13

0,43±0,11

СD3+DR-лимфоциты, %

24,2±3,2*

16,1±2,9*

СD3+DR-лимфоциты, 109

0,38±0,14

0,34±0,09

IgА, г/л

1,38±0,56*

2,09±0,28*

IgG, г/л.

10,9±1,9*

13,1±0,9*

IgМ, г/л

1,38±0,34

1,50±0,27

ЦИК, ед. оп. пл.

0,030±0,008

0,040±0,002

Примечание: *— р<0,05, ** — p<0,01

Это свидетельствует о повышенной функциональной активности иммунокомпетентных клеток. Экспрессия антигенов ведет к взаимодействию клеток с развитием целой цепи последовательных событий, оказывая роль стимулирующего фактора, индуцирующего иммунную систему.

Исследование показателей гуморального звена иммунитета (табл. 1) выявило у детей с ХГД, ассоциированным с грибами рода Candida, сниженный в 1,3 раза по сравнению с контрольной группой уровень IgG — до 10,2±1,4 г/л (р<0,001).

Таблица 1.

Показатели клеточного и гуморального звена иммунитета при ХГД у детей, ассоциированном с грибами рода Candida

Показатели

Обследуемая группа

Контрольная группа

СD3+-Т-лимфоциты, %

63,0±3,4**

68,3±1,5**

СD3+-Т-лимфоциты, 109

1,28±0,27

1,36±0,11

СD4+-Т-лимфоциты, %

29,2±3,8***

39,2±1,6***

СD4+-Т-лимфоциты, 109

0,59±0,12**

0,79±0,06**

СD8+-Т-лимфоциты, %

33,2±2,2

31,8±1,6

СD8+-Т-лимфоциты, 109

0,70±0,14

0,65±0,06

СD4+/СD8+

0,8±0,19***

1,2±0,07***

СD56+-Т-лимфоциты, %

20,3±2,6

20,9±1,5

СD56+-Т-лимфоциты, 109

0,42±0,11

0,44±0,04

СD19+-В-лимфоциты, %

11,5±1,6

10,6±0,7

СD19+-В-лимфоциты, 109

0,22±0,04

0,22±0,023

СD25+ -Т-лимфоциты, %

28,4±1,9**

16,4±1,2**

СD25+ -Т-лимфоциты, 109

0,42±0,09*

0,30±0,03*

HLADR+-лимфоциты, %

30,4±3,6**

22,6±1,6**

HLADR+-лимфоциты, 109

0,48±0,11

0,42±0,05

СD3+DR –лимфоциты, %

23,3±3,1*

15,8±1,7*

СD3+DR -лимфоциты, 109

0,37±0,12

0,33±0,06

IgА, г/л

1,62±0,41

1,95±0,16

IgG, г/л.

10,2±1,4***

12,8±0,6***

IgМ, г/л

1,48±0,33

1,56±1,36

ЦИК, ед. оп. пл.

0,036±0,005

0,042±0,016

Примечание: * — р<0,05, ** — p<0,01

При сравнении остальных параметров гуморального звена иммунитета статистически значимых различий не выявлено.

Выраженные изменения установлены при анализе показателей фагоцитарной активности нейтрофилов. Так, у детей обследуемой группы, по сравнению с контрольной, отмечено снижение фагоцитарного индекса, что составило соответственно 43,4±7,6% и 58,8±2,5 (р<0,001), а также показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста, а их значения составили 6,3±3,2% и 18,3±2,1 (р<0,001) и 41,6±4,9% и 58,8±2,5 (р<0,001) соответственно. Уменьшение спонтанного НСТ-теста указывает на снижение функционального состояния нейтрофилов, а индуцированного — на стойкий характер этого снижения. При этом в процессе фагоцитоза нейтрофилы не в состоянии метаболизировать эффекторный потенциал и активно отвечать развитием «респираторного взрыва» с продукцией активных форм кислорода (Маянский А.Н., 1986).

Экспрессия молекул адгезии на нейтрофилах у пациентов с ХГД, ассоциированным с кандидозной инфекцией, наоборот, была повышена по сравнению с контрольной группой. Так, относительное количество CD11b+ в обследуемой группе составило 85,6±3,0%, а в контрольной — 74,9±2,6% (р<0,01), CD18+ — соответственно, 84,3±3,2% и 74,2±2,9% (р<0,01). У больных обследуемой группы выявлено снижение относительного и абсолютного количества популяции клеток, экспрессирующих рецепторы цитолиза CD16+, что составило соответственно 31,1±4,2% и 0,87±0,14×х109/л, р<0,01 (тогда как в контрольной группе и 42,3±4,1% и 1,22±0,17 х109/л), что свидетельствует о дисфункции рецепторного аппарата нейтрофилов.

У пациентов с ЯБДК, ассоциированной с кандидозной инфекцией, отмечаются изменения показателей иммунного статуса, схожие с таковыми у больных с ХГД, на фоне выявления грибов рода Candida. Так, у детей обследуемой группы с ЯБДК по сравнению с контрольной отмечается (табл. 2) снижение относительного количества СD3+-Т-лимфоцитов до 53,1±3,0% (p<0,05), относительного и абсолютного количества СD4+-Т-лимфоцитов — соответственно, 23,0±1,8% (p<0,01) и 0,38±0,26×109/л (p<0,01) и соотношения СD4+/СD8+ — до 0,6±0,09 (p<0,05). При этом отмечается повышение экспрессии маркеров активации, на что указывает рост абсолютного и относительного числа СD25+ лимфоцитов, экспрессирующих рецептор для IL-2 соответственно до 0,53±0,09×109/л (p<0,05) и 31,9±3,2% (p<0,001), антигенов гистосовместимости II класса (HLADR+ — 31,2±3,6%, p<0,01), а также активированных Т-лимфоцитов (СD3+DR — 24,2±3,2%, p<0,05).

Изучение показателей гуморального звена иммунитета (табл. 2) выявило, что у детей с ЯБДК, ассоциированной с грибами рода Candida, по сравнению с контрольной группой снижен уровень IgG — до 10,9±1,9 г/л (р<0,05) и IgA — до 1,38±0,56 г/л (р<0,05).

Достоверные изменения установлены при анализе показателей фагоцитарной активности нейтрофилов Так, у детей обследуемой группы, по сравнению с контрольной, отмечается снижение фагоцитарного индекса, что составило соответственно 42,3±7,9% и 59,0±2,7% (р<0,001), а также спонтанного НСТ-теста — 6,2±3,3% и 18,0±2,4% (р<0,001) и стимулированного НСТ-теста — 40,3±4,8% и 54,9±2,6% (р<0,001).

Экспрессия молекул адгезии на нейтрофилах у пациентов с ЯБДК, ассоциированной с кандидозной инфекцией, наоборот, повышена. Так, относительное количество CD11b+ в обследуемой группе составило 86,9±3,2%, в контрольной — 77,1±2,7% (р<0,01), а CD18+ соответственно — 86,9±3,2% и 77,1±2,7% (р<0,01). У больных обследуемой группы выявлено снижение относительного и абсолютного числа эффекторных CD16+ клеток, экспрессирующих рецепторы цитолиза, соответственно до 26,0±4,5% и 0,81±0,17×х109/л (р<0,01), тогда как в контрольной группе эти показатели составили, соответственно, 44,9±6,1% и 1,21±0,19×х109/л.

У больных с хроническими заболеваниями гастродуоденальной зоны (ХГД и ЯБДК), ассоциированными с грибами рода Candida, установлена обратная корреляция между концентрацией циркулирующего кандидозного антигена в сыворотке крови и количеством CD4+-T-лимфоцитов (r= -0,77; р<0,05), соотношением СD4+/СD8+ (r= -0,79; р<0,05), показателями НСТсп-теста (r= -0,68; р<0,05) и НСТст-теста (r= -0,70; р<0,05). Таким образом, чем выше уровень антигенемии, тем ниже значения данных показателей. Установлены прямые взаимосвязи между концентрациями циркулирующего кандидозного антигена и количеством CD25+ (r=0,65; р<0,05), HLADR+ (r=0,66; р<0,05) и экспрессией молекул адгезии на нейтрофилах — СD11b+ (r=0,70; р<0,05) и CD18+ (r= -0,72; р<0,05). Наличие циркулирующего кандидозного антигена в сыворотке крови является показателем активности микотического процесса, так как он, в отличие от антител, быстро элиминируется из организма [7]. Поэтому имеющиеся взаимосвязи между уровнем антигена Candida spp и количеством Т-хелперов, соотношением CD4+/CD8+, ранними и поздними маркерами активации, экспрессией молекул адгезии на нейтрофилах позволяют рассматривать данные показатели в качестве иммунологических критериев кандидозной инфекции при хронических заболеваниях гастродуоденальной зоны у детей.

Итак, установлено, что в основе развития кандидозной инвазии при ХГД и ЯБДК у детей лежат нарушения в клеточном звене иммунитета и фагоцитарной активности нейтрофилов. Это проявляется снижением общего количества Т-лифоцитов за счет Т-хелперных субпопуляций и иммунорегуляторного индекса. Фагоцитарные дисфункции проявляются угнетением спонтанного и стимулированного НСТ-теста и фагоцитарного индекса. Спонтанный НСТ-тест зависит от эффективности метаболических процессов в клетке, в результате которых вырабатывает супероксид кислорода, определяющий интенсивность респираторного взрыва и способность к завершенному фагоцитозу. Поэтому снижение показателей НСТсп-теста может указывать на незавершенный фагоцитоз, а показателей НСТст-теста — на угнетение функционального резерва клетки. В то же время повышенная экспрессия молекул адгезии на нейтрофилах способствует миграции и взаимодействию клеток иммунной системы в месте инвазии, а повышенная активация иммунокомпетентных клеток обуславливает выживаемость гриба рода Сandida при незавершенном фагоцитозе.

Изучение показателей клеточного звена иммунитета у больных с ХГД и ЯБДК, ассоциированных с кандидозом, выявило достоверное уменьшение относительного числа СD3+-Т-лимфоцитов, абсолютного и относительного числа СD4+, соотношения CD4+/CD8+. Отмечается увеличение содержания ранних (СD25+) и поздних (HLADR+) активационных маркеров, а также активированных Т-лимфоцитов (СD3+DR), что отражает повышенную функциональную активность иммунокомпетентных клеток.

Исследование показателей гуморального звена иммунитета показало, что у детей с ХГД отмечается парциальное снижение уровня IgG (р<0,001), а при ЯБДК — уменьшение количества IgG и IgA (р<0,05).

При анализе показателей фагоцитарной активности нейтрофилов установлено снижение фагоцитарного индекса, спонтанного и стимулированного НСТ-теста, а также относительного и абсолютного числа клеток, экспрессирующих рецепторы цитолиза (CD16+), имеющих важное значение в качестве эффекторов противогрибкового иммунитета. Экспрессия молекул адгезии на нейтрофилах при ХГД и ЯБДК, наоборот, повышена, что способствует миграции и взаимодействию клеток иммунокомпетентной системы в месте инвазии.

Имеющиеся изменения иммунологических показателей у больных с ХГД и ЯБДК, осложненных инвазивным кандидозом, проявляются снижением преимущественно показателей клеточного звена иммунитета — общего числа Т-лимфоцитов за счет Т-хелперной субпропуляции, сдвиг индекса иммунорегуляции по гипохелперному типу на фоне повышения экспрессии ранних и поздних маркеров активации. Данные изменения характеризуют формирование Т-клеточного иммунодефицита, связанного с неэффективной активацией иммунной системы. Кроме этого, важное значение в формировании кандидозной инфекции при хронических заболеваниях желудка и двенадцатиперстной кишки у детей имеют и фагоцитарные дисфункции, проявляющиеся в угнетении метаболического потенциала и функционального резерва клетки, а также цитотоксических нейтрофилов на фоне повышения маркеров активации иммунной системы и экспрессии молекул адгезии на нейтрофилах. Уровень спонтанного НСТ-теста, отражающего эффективность метаболических процессов в клетке, коррелирует со способностью к завершенному фагоцитозу. Поэтому снижение показателей НСТсп-теста может указывать на незавершенность фагоцитоза, а показателей НСТст-теста — на угнетение функционального резерва клетки. В тоже время повышенная экспрессия молекул адгезии на нейтрофилах способствует миграции и взаимодействию клеток иммунной системы в месте инвазии, а повышенная активация иммунокомпетентных клеток обусловливают выживаемость гриба рода Сandida при незавершенном фагоцитозе.

 

Т.Г. Маланичева, Р.А. Файзуллина, Н.В. Зиатдинова, Р.Х. Нарыков

Казанский государственный медицинский университет,

Детская городская клиническая больница № 2, г. Казань

Маланичева Татьяна Геннадьевна — доктор медицинских наук, профессор кафедры пропедевтики детских болезней и факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета

 

Литература:

1.    Баженов Л.Г., Перепелова И.Н. Helicobacter pylori и грибы рода Candida при гастроэнтродуоденальной патологии // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1997. — № 3. — С. 100-101.

2.    Гомес Л.А., Ярцев М.Н., Каретников Ю.П., Хахалин Л.Н. Иммунологическая недостаточность при хроническом генерализованном кандидозе у детей // Педиатрия. — 1988. — № 10. — С. 43-47.

3.    Крылов А.А., Бугаев А.И., Уланова В.И. Роль грибов кандида в патогенезе язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки // Материалы IV съезда гастроэнтерологов. — 1990. — Т. 1. — С. 341-342.

4.    Лебедева Т.Н., Чернопятова Р.М., Мирзабалаева А.К., Соболев А.В. и др. Некоторые показатели гуморального иммунного ответа при кандидозе // Проблемы медицинской микологии. — 2002. — № 2. — С. 58.

5.    Палий Г.К., Иванова С.А. Грибы рода Сandida у больных с заболеваниями органов пищеварения // Успехи в области изучения и производства антибиотиков. — 1990. — Вып. — 19. — С. 117-123.

6.    Сардыко Н.В. Функциональная активность Т-лимфоцитов при кандидозе // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии. — 1992. — № 4. — С. 66-70.

7.    Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. — М.: Триада-X, 2001. — 472 с.

8.    Узунова А.Н., Петрунин А.А., Амбрамовская Л.В. Клинико-морфологические особенности гастродуоденита у детей, ассоциированного с кандидозной инфекцией // Проблемы медицинской микологии. — 2003. — № 2. — С. 49-50.

9.    Шевяков М.А. Диагностика и лечение кандидоза желудка // Проблемы медицинской микологии. — 2002. — № 2. — С. 50.

10.    Beno D.W., Stever A.G., Mathews H.L. Growth in inhibition of Candida albicans hyphae by CD8+lymphocytes // J. Immunol. — 1995. — Vol. 15. — 154:10 — P. 5273-5281.

11.    Bourford-Mason A.P., Willoughby J.M., Weber J.C. Association between gastrointestinal tract carriage of Candida, blood group O, and nonsecretion of blood group antigens in patients with peptic ulcer // Dig Dis. — 1993. — Vol. 38:8. — P. 1453-1458.