Проведено прицельное выборочное исследование антибактериальной активности пиритиона цинк («Скин-кап») в отношении вирулентных штаммов золотистого стафилококка (S. aureus), колонизирующих пораженную кожу у 40 пациентов с атопическим дематитом в возрасте от 1 года до 13 лет. Применение 0,2% крема «Скин-кап» или аэрозоля при местном лечении атопического дерматита по схеме 2 раза в день утром и вечером способствует снижению плотности колонизации кожи у детей золотистым стафилококком, а также приводит к элиминации с кожи наиболее вирулентных штаммов стафилококка этого вида.
В последнее десятилетие появились сообщения об эффективном использовании в качестве средства местной терапии атопического дерматита (АтД) 1-окси-2(1H)-пиридинтион цинк или пиритиона цинк (ПЦ). Пиритиона цинк имеет торговое название «Скин-кап», препарат с противовоспалительным, антибактериальным и противогрибковым действием. В рандомизированном исследовании подтверждена его безопасность и эффективность при применении у больных с АтД [1]. Исходя из анализа зарубежных и отечественных работ, установлено, что при развитии АтД возрастает в несколько раз колонизация кожи золотистым стафилококком с выраженными вирулентными свойствами, что значительно осложняет прогноз данного дерматоза у этой группы пациентов [2, 3[. В нашей работе проведено прицельное исследование антибактериальной активности препарата «Скин-кап» в отношении вирулентных штаммов золотистого стафилококка (S. aureus), колонизирующих пораженную кожу у больных с атопическим дерматитом. В связи с этим были поставлены следующие задачи исследования:
1. Оценить эффективность элиминации золотистого стафилококка (S. aureus) с кожи больных АтД при терапии с применением «Скин-кап».
2. Определить вирулентные свойства штаммов стафилококков, колонизирующих кожу пациентов, после проведения курса местной терапии с применением одной из лекарственных форм препарата «Скин-кап».
2. Определить клиническую эффективность по критериями, включающим показатели тяжести заболевания, динамику основных симптомов дерматита (кожный зуд, нарушение сна, кожных проявлений заболевания).
Материалы и методы исследования. В исследование были включены пациенты (n=40) в возрасте от 1 года до 13 лет. В процессе терапии все пациенты получали препарат «Скин-кап» по схемам в зависимости от распространенности процесса и формы аллергодерматоза: при ограниченной форме АтД использовали крем для наружного применения — 0,2% 2 раза в день (утром и вечером) на 4-6 ч до полного разрешения процесса (21 день); при наличии экзематизации, мокнутия, отека использовали аэрозоль для наружного применения — 0,2% 2 раза в день до полного разрешения процесса (21 день); при лихеноидной форме и на участки лихенизации кожи — крем для наружного применения — 0,2% 1 раз в день до полного разрешения процесса (21 день). У всех больных до начала терапии определяли тяжесть заболевания по SCORAD, IGA, выраженность местных изменений, выраженность кожного зуда и нарушения сна, а также проводили бактериологическое исследование кожи с оценкой видового спектра основных бактериальных представителей и плотности колонизации. Вирулентные свойства штаммов S. aureus, выделенные с кожи, определяли in vitro по термонуклеазной активности (ДНК-азная активность) [4,5], специфической иммунолобулин-расщепляющей активности иммуноферментным способом детекции [6], адгезивному потенциалу — индекс адгезии стафилококков (ИАС) по методу В.И. Брилис и др. [7], и антиоксидантным свойствам — методы определения активности супероксиддисмутазы и каталазы [8].
Результаты, отражающие клинические критерии эффективности проведенной терапии с применением двух лекарственных форм (0,2 % крема и аэрозоля) ПЦ в виде «Скин-капа» показали, что на 21-й день терапии у всех больных было отмечено снижение индекса тяжести заболевания (SCORAD) в 3,6 раза по сравнению с исходным уровнем (соответственно 51,2±0,5 и 14,2±0,7, p<0,05) и уменьшение уровня общего сывороточного IgE (через 3 недели от начала лечения на 13,8% от исходного уровня).
У всех пациентов к концу трехнедельного курса терапии отмечено также значительное купирование местных воспалительных изменений кожи (гиперемии, зуда, мокнутия), что сопровождалось улучшением общего самочувствия, в частности улучшился сон. Объективные критерии положительной динамики общего состояния пациентов к 21 дню терапии, такие как снижение в 3 раза выраженности зуда кожи (5,9±0,4 баллов и 2,0±0,3 баллов соответственно, p<0,05), снижение показателя нарушения сна — в 2,5 раза (5,0±0,3 баллов и 2,2±0,4 баллов, p<0,05), а также уменьшение объективного клинического критерия тяжести атопического дерматита — индекса IGA почти в 3 раза (3,3±0,3 баллов и 1,2±0,2 баллов соответственно, p<0,05) подтверждают клиническую эффективность терапии с применением препарата «Скин-кап» в данной группе пациентов.
До терапии и на 21-й день ее проведения у всех пациентов оценивали плотность колонизации пораженной кожи видом S. aureus и сравнительно сопоставляли выраженность вирулентных свойства у клинических штаммов золотистого стафилококка (адгезивность, активность ферментов распространения и антиоксидантной защиты).
Плотность колонизации пораженной кожи S. aureus к 21-дню терапии у пациентов данной группы достоверно снизилась по сравнению с исходным уровнем на 15% (log10 4,32±0,5 и 3,7±0,3 log10 КОЕ/см2 соответственно, p<0,05) (рисунок 1).
Рис. 1. Изменение плотности колонизации кожи S. aureus после терапии «Скин-капом». (* — различия в плотности колонизации до и после терапии достоверны, р<0,05)
Отмечено, что к концу терапии с участков пораженной кожи детей в возрасте до 5 лет, выделялись штаммы S. aureus со сниженными адгезивными свойствами (ИАС до терапии 4,6±0,5, после — 3,0±0,5, p<0,05), по сравнению со штаммами, колонизировавшими кожу этих пациентов до терапии. У детей в возрасте старше 5 лет к концу терапии достоверных различий в адгезивных свойствах между штаммами S. aureus, выделенными как до, так и после терапии выявлено не было (ИАС до терапии 4,8±0,5, после — 4,7±0,5, p>0,05).
При изучении вирулентных свойств у штаммов S. aureus, выделенных с кожи до и после лечения (21-й день), было показано, что к концу терапии кожа пациентов, колонизировалась штаммами со сниженными ферментативными свойствами, по сравнению с дотерапевтическим периодом. Активность гидролитических ферментов у штаммов, выделяемых к концу терапии, была достоверно ниже: активность IgG-протеиназ — в 1,5 раза, термонуклеазы — в 1,24 раза (p<0,05) (рис. 2, 3).
Активность антиоксидантных ферментов (каталазы и супероксиддисмутазы) у штаммов S. aureus, выделяемых к концу терапии с кожи пациентов, получавших «Скин-кап», была также достоверно ниже в 1,36 и 1,48 раза соответственно, по сравнению с активностью этих ферментов у штаммов S. aureus, до терапии (рис. 4, 5).
Рис. 2. Иммуноглобулин-расщепляющая активность внеклеточных протеаз штаммов S. aureus, выделенных до и после лечения. А- удельная активность фермента (мкмоль субстрата расщепленного за 1 минуту на 1 мг белка в питательной среде культивирования при оптимальных условиях)
Рис. 3. Активность термонуклеазы (TNase) лизатов штаммов S. aureus, выделенных с кожи до и после лечения. А×1000 — удельная активность термонуклеазы в жидкой питательной среде культивирования штаммов S. aureus
Рис. 4. Активность каталазы штаммов S. aureus, выделенных до и после лечения. А — активность каталазы бактериальных штаммов в мккаталах на 1 млн микробных клеток
Рис. 5. Активность SOD (супероксиддисмутазы) лизатов штаммов S. aureus, выделенных до и после лечения. А- удельная активность фермента, рассчитанная на 1 мг белка, содержащегося в лизате стафилококковых клеток
Обсуждение.
Необходимо отметить, что важную роль в развитии патологического процесса в коже при АтД играет плотность ее колонизации условно-патогенными видами бактерий, среди которых S. aureus является доминирующим видом. Выявлены значительные различия между здоровыми и пациентами атопическим дерматитом в плотности колонизации кожи золотистым стафилококком. Показано, что вероятность развития пиогенной инфекции кожи прямо пропорциональна плотности ее колонизации и обратно пропорциональна местным защитным реакциям [9]. В данной работе установлено, что наряду с положительной клинической динамикой при терапии с применением препарата «Скин-кап», наблюдается и снижение плотности колонизации кожи золотистым стафилококком, что достоверно отмечено нами в группе детей в возрасте до 5 лет. В предшествующих работах показано, что активность гидолитических ферментов стафилококков, выраженная в виде определенных штаммовых свойств, хактеризует вирулентность стафилококков кожи и может быть исследована in vitro для оценки их «болезнетворного» потенциала [10]. При проведении терапии в период выраженного обострения АтД кожа пациентов, как, правило, колонизируется стафилококками с высокой активностью гидролитических энзимов, а при проведении местной терапии с применением «Скин-капа», как нами было установлено, происходит элиминация штаммов, являющихся наиболее активными продуцентами этих энзимов, и замена на менее активные варианты S. aureus. Не менее значимо оценить антиоксидантный потенциал ферментов, образуемых штаммами S. aureus, в качестве биохимических маркеров, также косвенно характеризующих их патогенность. Изоляты стафилококков (S. aureus), колонизирующие кожу до терапии, характеризовались высокими показателями активности антиоксидантных ферментов. После проведения местной терапии препаратом «Скин-Кап» активность антиоксидантных ферментов (каталазы и супероксиддисмутазы) у штаммов S. aureus, колонизирующих кожу в этот период, была достоверно ниже, чем у штаммов, выделяемых с кожи до терапии. Таким образом, применение лекарственной формы пиритиона цинк в виде крема и аэрозоля у пациентов с АтД приводит к достоверному снижению плотности колонизации кожи золотистыми стафилококками и меняет качественный состав штаммов S. aureus (после терапии кожи колонизируется штаммами со сниженными ферментативными свойствами, что уменьшает вирулентный потенциал этих изолятов).
Выводы
Применение 0,2% крема «Скин-кап» или аэрозоля при местном лечении атопического дерматита по схеме 2 раза в день утром и вечером способствует снижению плотности колонизации кожи у детей золотистым стафилококком, а также приводит к элиминации с кожи наиболее вирулентных штаммов стафилококка этого вида, что косвенно характеризует его антибактериальную активность in vivo в отношении золотистого стафилококка у пациентов с атопической экземой (дерматитом).
Л. Т. Баязитова, Ю. А. Тюрин, С. Н. Куликов, Д. А. Долбин, Р. С. Фассахов Казанский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора
Тюрин Юрий Александрович — кандидат медицинских наук, с.н.с, заведующий лабораторией иммунологии и разработки аллергенов КНИИЭМ
Литература:
1. Фассахов Р. С., Сукманская Е.О., Решетникова И.Д.и др. Активированный цинк-пиритион («Скин-Кап») в лечении атопического дерматита у детей (результаты Российского многоцентрового исследования). Журн. Пульмонология, Аллергология 2007; 4: 43-46.
2. Мокроносова М. А. Влияние Staphylococcus aureus на течение атопического дерматита. Аллергология 2003; 1: 46-50.
3. Breuer K., Kapp A., Werfel T. Bacterial infections and atopic dermatitis. Allergy 2001; V.56: 1034-1041.
4. Приказ МЗ СССР № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях ЛПУ». М., 1985. с. 126
5. Герхардта Ф. Метод общей бактериологии. М., 1984.
6. Тюрин Ю.А. Протеиназная активность микрофлоры кишечника при острых кишечных инфекциях у детей: автореф. дис. … канд. мед. наук. Казань, 2003; 10-18.
7. Бриллис В. И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П. и др. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов. Лабораторное дело 1986; 4: 210-212.
8. Сирота Т. В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы. Вопросы медицинской химии 1999; 3: 21.
9. Leung D. Y. The immunologic basis of atopic dermatitis. Clin. Rev. Allergy 1993;11: 447- 469.
10. Баязитова Л.Т., Фассахов Р.С., Тюрин Ю.А., и др. Фенотипические особенности кокковой микрофлоры кожи в норме и при атопическом дерматите. Российский аллергологический журнал 2007; 4: 48-52.
