Изучение антимикробной активности мазей хлоргексидина биглюконата


Хлоргексидина биглюконат относится к антисептическим средствам широкого спектра действия. В зависимости от концентрации он проявляет бактерицидное или бактериостатическое действие на грамположительные и грамотрицательные бактерии, а также фунгицидное действие. Крайне редко после применения наблюдаются аллергические реакции в виде кожной сыпи, сухости кожи, зуда, дерматита, а также фотосенсибилизация и очаговое раздражение кожи. Химически инертен в отношении окружающих предметов, таких как одежда, изделия из стекла, пластмассы и металла.

В медицинской и фармацевтической практике хлоргексидина биглюконат широко используется в качестве лечебно-профилактического средства при различных инфекциях в хирургии, урологии, акушерстве-гинекологии, стоматологии, дерматологии, для профилактики инфекций, передающихся половым путем, антисептической обработки и дезинфекции. Анализ фармацевтического рынка показал, что хлоргексидина биглюконат применяется в виде гелей и кремов для наружного применения, пластырей, а также в виде концентрата для приготовления раствора [2, 5, 6]. Низкий процент побочных реакций и широкая область применения, делают актуальными исследования по созданию новых лекарственных форм хлоргексидина биглюконата.

Перспективной формой хлоргексидина биглюконата является мазь, применение которой возможно практически во всех областях медицины. Мы поставили перед собой цель изучить антимикробную активность мази, содержащую хлоргексидина биглюконат. При этом важно было оценить влияние на антимикробную активность мазевой основы и концентрации хлоргексидина биглюконата.

Хлоргексидина биглюконат в состав мазей вводили в концентрации 0,05–0,2–0,5%, что соответствует терапевтическому коридору лекарственного вещества. Учитывая, что весьма существенное влияние на активность лекарственных веществ оказывают влияние мазевые основы, мази готовили на липофильных (вазелин), гидрофильных (смеси полиэтиленоксидов) и липофильно-гидрофильных эмульсионных основах (консистентная эмульсионная основа, смесь вазелина, воды и эмульсионных восков в соотношении 6:3:1, смесь вазелина с ПЭО-400, эмульгатором Т-2 и водой в соотношении 60:15:10:15, смесь равных частей ланолина безводного, воды и масла подсолнечного), с целью отбора основы, обеспечивающей наибольшее проявление антимикробной и противогрибковой активности [1, 4].

Изучение антимикробной активности мазей проводили по оценке роста тест-микроорганизмов S. аureus и E.coli. Для этого брали суточную культуру музейных штаммов S. Аureus (АТСС 25923) и E.coli (АТСС 25922). Проводили смыв стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и разводили по стандарту мутности с последующим разведением до содержания в 1 мл взвеси 500 тыс. микробных клеток. На мясо-пептонный агар в чашках Петри помещали по 0,1 мл взвеси культуры микроорганизмов и равномерно распределяли по всей поверхности. С помощью стерильной гильзы в агаризованной среде с засеянными микроорганизмами вырезали лунки диаметром8 мм, в которые вносили образцы мазей в количестве0,2 г. Чашки Петри термостатировали 24 часа при37 °Cи определяли зоны ингибирования роста микроорганизмов в мм. В качестве положительного контроля использовали питательную среду с тест-культурой микроорганизмов, на которые в стандартные лунки помещали 0,2 мл водных растворов хлоргексидина биглюконата исследуемых концентраций. Отрицательным контролем служили основы без лекарственного вещества [3].


Экспериментально было установлено, что в мазях на всех изучаемых основах прослеживается прямая зависимость повышения антимикробной активности с увеличением концентрации хлоргексидина. Подавление роста S. Аureus от 40 до 60 % выше в случае мазей, содержащих 0,5 % хлоргексидина биглюконата в сравнении с мазями, содержащими 0,05 % изучаемого вещества. Такая же закономерность наблюдается и в отношении E.coli. Установлено также, что консистентная эмульсионная основа и основа, состоящая из смеси равных частей ланолина безводного, воды и масла подсолнечного полностью подавляют проявление антимикробной активности мази в отношении E.coli.

Противогрибковую активность мазей изучали на трехсуточной музейной культуре C. аlbicans, полученной из ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Из выросшей культуры готовили взвесь, содержащую 200 тыс. микробных клеток в 1 мл физиологического раствора. В чашки Петри разливали по 20 мл расплавленной и охлажденной до45 °Cсреды Сабуро, после застывания на поверхность среды наносили по 2 капли взвеси микроорганизмов, тщательно распределяли по всей поверхности шпателем. Чашки оставляли полуоткрытыми при комнатной температуре для лучшего впитывания микробной взвеси. С помощью гильзы диаметром8 ммв засеянной среде вырезали лунки, в которые вносили по 0,2 образцов мазей. Чашки термостатировали при25 °C. Через 14 дней замеряли диаметр зоны задержки роста C. аlbicans (в мм). Положительным контролем служила питательная среда с тест-культурой микроорганизмов, на которые в стандартные лунки помещали 0,2 мл водных растворов хлоргексидина биглюконата. Отрицательным контролем служили изучаемые мазевые основы без лекарственного вещества.

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о непосредственном влиянии мазевой основы на проявление активности лекарственного вещества. Так, мази на основе вазелина, смеси вазелина, ПЭО-400, эмульгатора Т-2 и воды в соотношении 60:15:10:15; смеси вазелина, воды, эмульсионных восков в соотношении 60:30:10, консистентной эмульсионной основе; смеси ланолина безводного, воды и масла подсолнечного в равных соотношениях активности в отношении C. аlbicans не проявили, так как данные основы полностью блокируют противогрибковую активность хлоргексидина биглюконата. Мази изготовленные на основах, обеспечивающих фунгицидную активность хлоргекидина, показали прямую зависимость между концентрацией хлоргексидина биглюконата в мази и зонами задержки роста C. аlbicans. Так, 0,5% мази хлоргексидина на различных основах от 24 до 37 % более активны в отношении C. аlbicans в сравнении с 0,05% и 0,2% мазями.

Таким образом, проведенный эксперимент позволил обосновать влияние концентрации хлоргексидина биглюконата в мази на проявление антимикробной и противогрибковой активности, а также показал влияние мазевой основы на проявление фармакологической активности изучаемого лекарственного вещества.


 

 Г.Ю. Меркурьева,  С.С. Камаева, С.Б. Богданова ,  Ю.Р. Галиахметова

Казанский государственный медицинский университет, г. Казань

Литература:

1. Багирова В.Л. Современный взгляд на лекарственную форму / В.Л.Багирова, Н.Б.Демина, Н.А.Кулинченко // Фармация. – 2002. – № 2.– С.24–26.

2. Григорьев В.Е. Антимикробное действие хлоргексидина биглюконата на микрофлору влагалища / В.Е.Григорьев, А.А.Байрашева // Вестник дерматологии и венерологии. – 1989. –  № 1. – С. 429–430.

3. Гунар О.В. Методы определения антимикробного действия лекарственных средств / О.В.Гунар, К.А.Каграманова //Хим.–фарм. Журнал.– 2005. – Т. 39. – № 5. – С. 53 – 55.

4. Зеликсон Ю.И. Развитие отечественной технологии мазей в третьей четверти ХХ века / Ю.И.Зеликсон // Фармация. – 2001. – № 1. – С. 45 – 47.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства./ М.Д.Машковский. – 15-е изд., перераб., испр. и доп. – М.: Новая волна: Издатель Умеренков, 2007. – 1206 с.

6. Регистр лекарственных средств в России. Энциклопедия лекарств. 10-е изд., перераб. и доп. / Под ред. Г.Л.Вышковского. – М.: РЛС–2001. – 2003. – 1608 с.